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    3,4-二羥基苯甲醛報告

    規格:99%
    包裝:1kg
    最小購量:1kg
    CAS:139-85-5
    分子式:C7H6O3
    分子量:138.12

    原兒茶醛報告

    HPLC法測定胎羊血漿中原兒茶醛的濃度

        丹參為唇形科鼠尾草屬植物丹參(Salvia miltior. rhiza Bge.)的干燥根及根莖。丹參具有祛瘀止痛,活 血通經,清心除煩的功效。在婦產科方面,丹參制劑 常被用于治療妊娠高血壓綜合征、妊娠肝內膽汁淤積 癥、胎兒窘迫等疾病¨ 。但對于丹參制劑是否會經 母體進入胎兒體內尚不明確。本研究通過測定胎羊血 漿中丹參的有效成分原兒茶醛 ,考察丹參是否能通 過母羊進入胎羊體內,對研究丹參制劑在妊娠期應用 是否安全具有重要的意義。
     1材料

     1.1儀器、藥品和試劑HPI100高效液相色譜儀; 丹參粉針劑,哈爾濱中藥二廠,批號:060904,實驗時 用生理鹽水溶解;原兒茶醛(批號:0810—200004)、卡 馬西平對照品(批號:0412—9503),中國藥品生物物 制品檢定所;水為超純水,甲醇為色譜純,其他試劑 均為分析純。

     1.2動物健康綿羊(湖羊)8頭,羊齡2~3歲,體重 40~50 kg,由蘇州大學醫學院實驗動物中心提供,實 驗動物生產許可證號:XCYK(蘇)2002—2008。

     2方法與結果

     2.1孕羊的外科手術及標本采集健康綿羊8頭, 于妊娠116~125 d行母羊及宮腔內胎羊外科手術。術前24 h母羊禁食、禁水。術前和術中用氯胺酮和 異氟烷聯合麻醉。母羊仰臥位固定,于下腹近腹中線 分層進腹,探查子宮,了解胎方位,固定胎羊后肢后 切開子宮壁,拉出后肢,于胎羊腹股溝中點偏內側處 分別分離股動脈、股靜脈,遠端結扎,近端插入動靜 脈導管,固定后回納胎羊于宮腔內??p合子宮壁后并 固定導管,縫合母羊腹壁,各種插管引至母羊背側部 固定。術中母羊頸靜脈插管補液,預防感染。術后 24 h母羊可恢復正常飲食飲水。用滅菌肝素鹽水疏通 導管,分別給母羊靜注慶大霉素72 mg,青霉素1 g 和胎羊靜注慶大霉素8 mg,青霉素33 mg,每日1 次。手術恢復4—5 d后,通過母羊股靜脈分別給予 不同劑量丹參粉針,于給藥不同時間點分別采集胎羊 動脈血,取血分離血漿,于一20℃保存備用。

     2.2色譜條件 色譜柱:Hypersil ODS柱(250× 4.6 mm,5 Ixm);流動相由甲醇(A)和0.2 tool-L 的 醋酸銨溶液(硫酸調pH至2.8)(B)組成,進行梯度洗 脫,在0—4 rain,B體積分數為70%,4~12 rain,B 體積分數由70%線性改變至10%,再返回起始流動 相;檢測波長:280 nm;流速:1.0 mL·min ;柱 溫:35℃ 。

     2.3供試品溶液的制備 取血漿樣品250 IxL,加 1 mol·L 鹽酸100 L,酸化,加內標溶液20 L,無水乙醚2 mL渦旋7昆和提取2 min,離心(4000 r· min )10min。分取有機層,40cc水浴上通氮氣揮干。 臨用前殘渣用100 IzL流動相溶解,進樣20 L。

     2.4標準曲線的制備

     2.4.1標準工作液精密稱取原兒茶醛對照品適量, 加1% 醋酸配成濃度為0.2 mg·mL 的貯備液 , 4℃保存。臨用前,取原兒茶醛貯備液適量,用1% 醋酸溶液按倍數稀釋法稀釋至所需濃度。

     2.4.2內標溶液精密稱取卡馬西平適量,用甲醇定 量稀釋配成25 Ixg·mL 的內標溶液。

     2.4.3標準曲線的制備精密吸取不同濃度的原兒茶醛標準工作液5O L,加入空白血漿200 IxL,從“加 1 mol·L 鹽酸100 IxL”起,按“供試品溶液的制 備”方法處理。以原兒茶醛與內標的峰面積比對原兒 茶醛的濃度進行線性回歸,即得標準曲線。

     2.5樣品測定方法精密吸取供試品溶液20 L注入 高效液相色譜儀,記錄原兒茶醛與內標的峰面積,以原兒茶醛與內標的峰面積比為定量指標,根據標準曲 線計算相應的血藥濃度。

     2.6分析方法的評價

     2.6.1特異性在本實驗條件下,原兒茶醛有良好的 分離度,羊血清中雜質峰不干擾樣品峰和內標峰的測 定。原兒茶醛和內標的保留時間分別是4.8 rain和 12.6 min,結果見圖1。

     2.6.2精密度取空白血漿200 L,加入不同濃度 的原兒茶醛標準工作液50 L,制成高、中、低3種 不同濃度樣品,按“供試品溶液的制備”方法處理, “樣品測定方法”測定,考察原兒茶醛的日內、日間 精密度,結果見表1。

     2.6.3線性關系 取空白血漿250 IxL數份,分別加 入不同濃度原兒茶醛標準品,配制成濃度為0.02~ 12.5 g·mL 的標準品系列溶液,按“標準曲線的 制備”方法處理。記錄原兒茶醛峰面積和內標峰面 積, 以樣品峰面積與內標峰面積之比(Y)對原兒茶醛濃度(x)作線性回歸,得回歸方程:Y=一0.0289+ 0.158X,r=0.999,說明在0.02~12.5 Ixg·mL 范 圍內原兒茶醛與內標的峰面積比(A樣品/A內標)與其血 漿濃度線性關系良好,其最低定量限為20 ng·mL一1 o

     2.6.4回收率按“精密度”方法,計算測得量,用 測得量與加入量計算回收率,結果見表2。

     2.7胎羊血漿藥物濃度的測定及結果將備用的血漿 37。(=溶解后,按“樣品測定方法”測定,母羊靜注 200,400,800 mg丹參粉針劑后胎羊血漿中原兒茶醛的濃度結果見表3,相應的平均藥一時曲線見圖 2。結果表明,于0.083,0.5,1.5 h,3個劑量組均 測得胎羊血漿中含有原兒茶醛,且隨著給藥劑量的增 加,血藥濃度呈上升的趨勢,具有一定的相關性。原 兒茶醛在胎羊體內很快吸收,達峰時間0.083 h,而 后以較快速度消除。2 h后,未測到原兒茶醛。

     由于中藥制劑成分復雜,被測成分含量較低, 而胎羊體內濃度更低,給研究帶來一定難度。本文 以原兒茶醛為檢測指標, 以卡馬西平為內標,用 HPLC法測定胎羊血漿中的原兒茶醛濃度,方法簡 便可行。丹參制劑在妊娠期的研究已有很多,但多 限于機理探討和臨床應用 。本研究通過測定胎 羊血漿中原兒茶醛的濃度,明確了丹參制劑中原兒 茶醛可以通過胎盤屏障進入胎羊體內的,而且給藥 劑量與胎羊的血藥濃度具有一定相關性,但是否對 胎兒造成影響,尚需對丹參制劑的安全性作進一步研究。

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